Thí nghiệm: Tách, chiết ADN theo chương trình SGK sinh học 10

1. Chuẩn bị

Dụng cụ: Cối nghiền (hoặc máy xay sinh tố), giấy lọc hoặc vải màn hay lưới lọc, ống nghiệm, giá ống nghiệm, dao, các bát nhỏ đựng dung dịch, que tre
Hóa chất: Nước lạnh, cồn, nước rửa chén
Mẫu vật sống: Gan, dứa.


2. Các bước tiến hành

Bước 1: Nghiền mẫu vật.

Loại bỏ lớp màng bao bọc gan rồi thái nhỏ gan cho vào cối nghiền hoặc máy xay sinh tố để tách rời và phá vỡ các tế bào gan . Nếu nghiền gan trong cối xay sinh tố thì khi nghiền cần cho vào cối một lượng nước lạnh gấp đôi lượng gan. Nếu nghiền bằng chày cối thì sau khi nghiền xong đổ thêm một lượng nước gấp đôi lượng gan rồi khuấy đều.
Lọc dịch nghiền qua giấy lọc hoặc vải màn hay lưới lọc để loại bỏ các phần xơ lấy dịch lỏng.

Bước 2: Tách ADN ra khỏi tế bào và nhân tế bào.

Lấy một lượng dịch lọc cho vào ống nghiệm chiếm khoảng 1/2 thể tích ống nghiệm, rồi cho thêm vào dịch nghiền tế bào một lượng nước rửa chén bát với khối lượng bằng 1/6 khối lượng dịch nghiền tế bào. Sau khi khuấy nhẹ, để yên trong vòng 15 phút trên giá ống nghiệm. Chú ý tránh khuấy mạnh làm xuất hiện bọt.
Cho tiếp vào ống nghiệm một lượng nước cốt dứa bằng khoảng hỗn hợp dịch nghiền tế bào chứa trong ống nghiệm và khuấy thật nhẹ. Chuẩn bị nước cốt dứa như sau: Dứa tươi gọt sạch thái nhỏ và nghiền nát bằng máy xay sinh tố hoặc bằng chày cối sứ, sau đó lọc lấy nước cốt dứa bằng giấy lọc hoặc lưới lọc và cho vào ống nghiệm sạch.
Để ống nghiệm trên giá trong khoảng thời gian từ 5 đến 10 phút 

Bước 3: Kết tủa ADN trong dịch tế bào bằng cồn.

Nghiêng ống nghiệm và rót cồn Etanol 70 độ dọc theo thành ống nghiệm một cách cẩn thận sao cho cồn tạo thành một lớp nổi trên bề mặt hỗn hợp với một lượng bằng lượng dịch nghiền có trong ống nghiệm.
Để ống nghiệm trên giá khoảng 10 phút và quan sát lớp cồn trong ống nghiệm . Chúng ta có thể thấy có phân tử ADN kết tủa lơ lửng trong lớp cồn dưới dạng các sợi trắng đục.

Bước 4: Tách ADN ra khỏi lớp cồn.

Dùng que tre đưa vào trong lớp cồn, khuấy nhẹ cho các phân tử ADN bám vào que tre rồi vớt ra và quan sát. Do các sợi ADN kết tủa dễ gãy nên khi vớt ADN ra khỏi ống nghiệm cần phải rất nhẹ nhàng